| 產(chǎn)品編號(hào) | D-9115 |
| 英文名稱(chēng) | DiI iodide |
| 中文名稱(chēng) | DiI碘化物 |
| 別 名 | DiI iodide [1; 1‘-Dioctadecyl-3; 3; 3’; 3‘- tetramethylindocarbocyanine iodide] |
| 克 隆 號(hào) | |
| CAS | N/A |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | Store at -20℃, protect from light. |
| 產(chǎn)品介紹 |
DiI, DiO, DiD and DiR dyes are a family of lipophilic fluorescent stains for labeling membranes and other hydrophobic structures. The fluorescence of these environment-sensitive dyes is greatly enhanced when incorporated into membranes or bound to lipophilic biomolecules such as proteins although they are weakly fluorescent in water. They have high extinction coefficients, polarity-dependent fluorescence and short excited-state lifetimes. Once applied to cells, these dyes diffuse laterally within the cellular plasma membranes, resulting in even staining of the entire cell at their optimal concentrations. The distinct fluorescence colors of DiI (orange fluorescence), DiO (green fluorescence), DiD (red fluorescence) and DiR (deep red fluorescent) provide a convenient tool for multicolor imaging and flow cytometric analysis of live cells. DiO and DiI can be used with standard FITC and TRITC filters respectively. Among them DiI and its analogs are most frequently used since they usually exhibit very low cell toxicity. In addition, DiI is widely used for determining lipoproteins such as LDL and HDL. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，這類(lèi)染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類(lèi)染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在活體成像中用來(lái)示蹤。 儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。 溶解性：可溶于無(wú)水乙醇、DMSO和DMF，其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時(shí)可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。 使用方法 1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備 （1）配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。 注意：未使用的儲(chǔ)存液保存在-20 oC，避免反復(fù)凍融。 （2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。 注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找最佳條件。 2. 懸浮細(xì)胞染色 （1）懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。 （2）在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。 （3）染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。 （4）傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。 （5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。 3. 粘壁細(xì)胞的染色 （1）使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。 （2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。 （3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。 （4）在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。 （5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。 4. 顯微鏡檢測(cè) （1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)表1。 （2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定： a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004； b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007； c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005 5. 流式細(xì)胞儀的檢測(cè) DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 |
